Вслед за Кортесом в Центральную и Южную Америку устремились новые завоеватели, объятые неистребимым желанием скорой наживы и околдованные легендами о несметных сокровищах страны Эльдорадо.
В это время на огромной территории от юга Колумбии до Чили существовала империя инков. Во главе государства стоял Великий Инка. Легенды о богатстве инков достигли Европы и породили «Золотую лихорадку», которая лишила покоя многих. В начале 1531 г. испанский подданный Франсиско Писарро повел в поход из Панамы три корабля, на которых было 110 пеших и 67 конных воинов. Его экспедиция причалила к берегу в перуанском порту Тумбес. В это время страну инков потрясала гражданская война: за трон императора сражались два кровных брата. Эта междуусобица облегчила испанцам победу. В ноябре 1532 г. победивший претендент, Атауальпа, был захвачен в плен. Он согласился выкупить свободу, наполнив комнату, где его содержали, серебром и золотом. Но императора это не спасло. Испанцы обвинили его в заговоре против Испании и казнили. Смерть Великого Инки повергла в хаос его империю. Испанцы, почти не встречая сопротивления, дошли до столицы инков Куско и захватили город.
В империи инков испанцы нашли огромное количество золота в виде украшений и других изделий, но не нашли его месторождений. В мае 1541 г. брат Франсиско Писарро Гонсало и Франсиско де Орельяна, сподвижник Кортеса, во главе отряда, в который входили 200 испанцев и 4000 рабов-индейцев, вышли из Кито (столица совр. Эквадора) в поисках Эльдорадо — «золотой страны». Основанием для легенды об Эльдорадо послужил религиозный обычай коренного населения современной Колумбии, обязывавший его вождя в день коронации выплывать на плоту на середину священного озера Гуатавита, где он, осыпав себя золотым порошком, совершал жертвоприношение. Перейдя через Анды, где было так холодно, что многие индейцы замерзли насмерть, отряд спустился по восточному склону хребта, покрытому тропическим лесом, и вступил в Амазонскую низменность. Люди голодали, болели желтой лихорадкой, умирали.
Прорубая дорогу шпагами и мачете, испанцы добрались до реки Напо, где они из подручных средств сколотили лодку, так как двигаться по суше вдоль берегов Напо было невозможным: они были заболочены и покрыты непроходимым лесом. На судне разместили снаряжение, а также больных и раненых. Индейцы рассказали, что ниже по течению лежит земля, где много пищи и золота. Писарро отправил Орельяну и с ним 50 человек на разведку. Орельяна достиг указанного места, но не обнаружил продовольствия. Путь назад был отрезан — течение несло их вперед. 12 февраля 1542 г. лодки прошли место, где соединяются три реки, и самая большая из них была «широка, как море». Тем временем Писарро был вынужден вернуться домой ни с чем. На обратном пути погибли все индейцы, а испанцы не могли войти в Кито, пока им не принесли новую одежду.
Орельяна, плывший со своей командой по могучей реке, не знал, что они вышли на Амазонку — самую многоводную реку мира. Через месяц они причалили к берегу, где было индейское селение. Здесь испанцы построили еще одну лодку, которую назвали «Виктория», и продолжили плавание. Им казалось, что великой реке не будет конца, но, опасаясь отравленных стрел индейцев, приставали к берегу только в экстренных случаях. В июле 1542 г. экспедиция приплыла в дельту Амазонки, а 26 августа вошла в Атлантический океан.